ROTOR+最初是為芽殖酵母(釀酒酵母)遺傳學(xué)而設計。對萊茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)進(jìn)行大規模的遺傳篩選，ROTOR+的功能可以發(fā)揮很大的作用。然而，衣藻與出芽酵母菌在細胞大小、生長(cháng)速度、菌落形態(tài)和粘附性以及光響應性方面存在差異。因此，ROTOR+能否適用于衣藻類(lèi)研究成為了關(guān)鍵。
因此在測試過(guò)程中要解決的下面的問(wèn)題顯得尤為重要：
Q1：細胞是否通過(guò)ROTOR+可靠地從液體或固體介質(zhì)中挑取到RePads復制針板上，在針頭之間、針板之間、不同平板間，細胞的數量/密度是否可以再生?
A1：可重復性挑取和接種的細胞數量，取決于細胞的表面特性：有多粘稠，粘附(或被排斥)在瓊脂表面的程度等等。衣藻在這些特性上不同于酵母。例如，在使用絲絨(酵母的標準方法)進(jìn)行復制時(shí)，衣藻菌落有很強的傾向，要么*粘在平板上，要么*轉移到絲絨上。
Q2：細胞在此過(guò)程中是否保持高活力?
A2：轉移的細胞保持高活力顯然是必要的。從我們最初的工作中可以清楚地看出，在許多方面，衣藻在某些操作過(guò)程中比酵母菌或大腸桿菌更容易受到損傷。例如，當從瓊脂上挑取到玻璃或不銹鋼針上時(shí)，衣藻在空氣中大約40秒后就會(huì )幾乎*喪失生存能力。
Q3：針頭之間、源板之間或靶板之間是否有明顯的交叉污染?
A3：根據生物體的特性，可以很容易地想象，活細胞氣溶膠可以通過(guò)ROTOR+復制操作傳播，導致交叉污染和破壞實(shí)驗。
Q4：使用ROTOR+可以可靠接種和區分的菌落最大密度是多少?
A4：菌落可以被接種的最大密度取決于生物體的大小和生長(cháng)速度，并將影響對生物體進(jìn)行篩選的通量。
首先通過(guò)ROTOR+對液體到瓊脂的轉移展開(kāi)相關(guān)實(shí)驗。
用Singer PlusPlates方板，注入50ml的TAP瓊脂(標準衣藻培養基)，并添加了50μg/ml氨芐西林來(lái)抑制細菌污染。由于衣藻在液體介質(zhì)中具有很強的流動(dòng)性，對光線(xiàn)也有很強的敏感性，因此需要將ROTOR+上的內部光源取下，并在操作過(guò)程中盡可能遮擋光線(xiàn)。如果沒(méi)有這種預防措施，藻類(lèi)會(huì )在源板的不同區域強烈聚集，會(huì )嚴重影響整個(gè)板的菌落再現性。
用一個(gè)注入25ml TAP的液體培養基平板，其中含有約10^6cells/ml濕的衣藻(cc-124背景)，用384RePad長(cháng)針，從液體到瓊脂，從384密度排列成1536密度，(針重復利用)。在33°C強光照下培養3天(圖1A)，每隔一段時(shí)間顯微鏡觀(guān)察。
圖1：液體到瓊脂轉移
可以看到菌落具有明顯的活力，基本上每個(gè)細胞被接種18小時(shí)都形成了一個(gè)微菌落(圖1C)。平板的圖像顯示了接種區域的再生性，不同平板之間也觀(guān)察到良好的再生性。
另一方面，在這種固定密度下，菌落之間有明顯的空間分隔，中間沒(méi)有污染的菌落產(chǎn)生。
ROTOR+從挑取到接種需要5-10秒。為了測定在空氣中RePad上的衣藻活力，在挑取衣藻后和接種前分別暫停0、10、20和40秒，轉移的細胞數量及培養后的活力基本保持不變。從含有50ml細胞懸浮液的SINGER平板中，測試了液體到瓊脂的轉移，結果基本相同，表明了有效液滴大小與針插入的液體深度幾乎無(wú)關(guān)。
接下來(lái)通過(guò)ROTOR+從瓊脂到瓊脂的轉移展開(kāi)實(shí)驗。
以含有TAP瓊脂的Singer PlusPlate方板為來(lái)源板，上有cc-124背景的衣藻菌膜。使用384RePad長(cháng)針挑取細胞并轉移到新板上，連續點(diǎn)種16個(gè)點(diǎn)，過(guò)程中不回到來(lái)源板，這形成6144個(gè)點(diǎn)，每16個(gè)點(diǎn)逐漸稀釋接種物。用顯微鏡檢查這些培養皿，并培養成菌落。
從培養的菌落來(lái)看，菌落直徑約1毫米，連續接種導致轉移細胞的數量逐漸減少，該方法可用于將接種密度降低到孤立的單細胞。瓊脂-瓊脂接種的細胞存活率通常很高，幾乎相當于液體-瓊脂接種。
一般來(lái)說(shuō)，單個(gè)細胞和由此產(chǎn)生的菌落和微菌落都停留在由針的幾何形狀決定的空間邊界內，因為衣藻在平板上是不活動(dòng)的，而且幾乎不需要噴霧或氣溶膠就可以精確地進(jìn)行操作。因此，這些程序適用于在有限的空間和耗材里，最大限度培養和轉移衣藻。
